1. Úvod:Stav pacienta, vlastní způsob odběru, doprava vzorku do laboratoře, skladování a další manipulace se vzorkem před provedením vlastního měření mohou významně ovlivnit výsledek a interpretaci testu. Tato etapa vyšetření se nazývá preanalytická fáze.
Některé faktory lze ovlivnit: fyzická aktivita pacienta před odběrem, stres, cirkadiánní změny parametrů, potrava a nápoje před odběrem, alkohol, kouření, léky, postup při odběru, transportu a skladování. Jiné faktory jsou na našem úsilí nezávislé, ale musíme s nimi počítat při hodnocení výsledku: pohlaví, věk, gravidita, probíhající onemocnění atd.
2. Odběr venózní srážlivé krveVětšina vyšetření se provádí ze séra pacienta získaného sedimentací nebo centrifugací venózní srážlivé krve.
Nejvhodnější je odběr do transportních zkumavek se separačním gelem, který brání vzniku hemolýzy. Po odběru je nutno zkumavku několikrát jemně převrátit o 180° a zpět.
V den odběru je možno dopravit do laboratoře Interimun Pardubice plnou krev bez stáčení. V tom případě se po odběru zkumavka nechá stát při pokojové teplotě cca 1 - 2 hodiny. Poté se uchovává při 4 - 8°C až do předání svozové službě, která zajistí dopravu za optimálních podmínek.
Pokud odebraný vzorek nelze transportovat do cílové laboratoře v den odběru, nechá se stát při pokojové teplotě cca 1 - 2 hodiny. Poté je stočeno a odděleno sérum. Centrifugaci může provést blízká biochemická nebo jiná laboratoř. Sérum lze u většiny analytů uchovávat při 20 - 25°C maximálně 24 hodin, při 4 - 8°C maximálně 7 dnů. V této době je třeba jej dopravit do cílové laboratoře. Při delším skladování je nutné séra zamrazit při -20°C. Opakované rozmražení vzorků není vhodné.
Výjimky z těchto zásad jsou uvedeny dále pro konkrétní analyty.
Množství odebírané krve záleží na počtu prováděných vyšetření – např. na 5 vyšetření je třeba zaslat cca 5 ml srážlivé krve, na 10 a více vyšetření (specifické IgE) je nutno počítat nejméně s 10 ml krve.
Speciální požadavky na odběr a zacházení se vzorky jsou u následujících analýz:
2.1 Odběr pro vyšetření aktivity komplementu (venózní srážlivá krev)
Vyšetření parametrů komplementového systému je vysoce citlivé na odběr krve a následnou manipulaci se vzorkem. Nevhodná manipulace se vzorky může vést k aktivaci komplementové kaskády in vitro, ke spotřebování jednotlivých komponent, a tak následně k falešně nízkým hodnotám testu.
Je doporučeno použít čistou odběrovou zkumavku, nejlépe skleněnou, bez separačního gelu a aktivátorů srážení. Potřebný objem je cca 5 ml plné krve. Odebraná krev by neměla být vystavena slunečnímu záření ani vyšší než pokojové teplotě. Po zhruba 60 - ti minutách srážení je třeba oddělit sérum, nejlépe centrifugací v chlazené centrifuze. Sérum se poté doporučuje skladovat na suchém ledu a takto jej transportovat do vyšetřující laboratoře. Méně striktní, ale přijatelnou alternativou je skladování a transport při 4 - 8°C (lednice). Nevhodná k vyšetření jsou séra opakovaně rozmražená, ikterická, lipemická a hemolytická. Nelze použít plazmu.
2.2 Odběr pro stanovení ECP (venózní srážlivá krev)
Odběr je třeba provádět zvláště opatrně (hemolýza znehodnocuje výsledek), nejlépe do zkumavky Becton Dickinson Vacutainer SST II Advance, kterou vám na požádání dodáme. Po odběru je třeba materiál opatrně promíchat (několikerým obrácením). Zkumavku nechat stát nejlépe 60 min při laboratorní teplotě (20 - 24°C), poté stočit a oddělit sérum. Sérum lze uchovat při 4 - 8°C maximálně 5 dnů. Při delším skladování je nutno ho zamrazit.
Test je validní pouze v případě, že je sérum od krevního koláče odděleno maximálně do 2 hodin od odběru. Plnou krev je proto do naší laboratoře možné zaslat pouze v případě, že bude dodržen takto rychlý transport. V případě zaslání plné krve proto pro kontrolu prosíme uvést na žádance hodinu odběru.
3. Odběr venózní nesrážlivé krve
3.1 Odběr pro test Quantiferon -TB (venózní nesrážlivá krev)
Používá se heparinizovaná krev odebraná do tří speciálních vakuových zkumavek, které na vyžádání dodá laboratoř.
Zkumavka s červeným víčkem označená TB obsahuje na vnitřním povrchu lyofilizované mykobakteriální antigeny, zkumavka s fialovým víčkem (MIT) obsahuje mitogen a zkumavka se šedým víčkem (NIL) je prázdná a slouží jako kontrola.
Spolu se zkumavkami dodáváme i leták s podrobnými pokyny k odběru. Zkráceně se jedná o následující zásady:
- uchovávat prázdné odběrové zkumavky důsledně v lednici při 4 - 8°C
- odebrat správný objem krve (3x1 ml)
- po odběru opakovaným obrácením zkumavky dostat do kontaktu vzorek krve s lyofilizovanými antigeny přítomnými na vnitřním povrchu zkumavky
- zkumavky po odběru uchovávat při teplotě 17 - 27°C
- vzorek dopravit do laboratoře k dalšímu zpracování co nejdříve, nejpozději 16 hodin po odběru
Pozn.:
Vzorky jsou po převzetí laboratoří inkubovány 20 hodin v termostatu při 37°C, poté je nutné oddělit plazmu. Z tohoto důvodu
není vhodné vzorky odebírat ve dnech, po kterých následuje den pracovního volna (pátky aj.). Výjimky jsou možné pouze po předchozí dohodě s laboratoří.
3.2 Odběr pro základní cytometrickou analýzu lymfocytů periferní krve (venózní nesrážlivá krev)
Pro vyšetření parametrů buněčné imunity se používá plná krev odebraná do heparinu. Po odběru je nutné obsah zkumavky opatrně promíchat (pomalým obrácením nebo kýváním), uchovat při pokojové teplotě a předat svozové službě nebo jinou cestou dopravit do laboratoře, pokud možno v den odběru nebo následující den. Vyšetření lze provést i ze vzorku ošetřeného jiným protisrážlivým činidlem (citrát, EDTA), pokud nejsou současně požadována funkční vyšetření.
Pro vyšetření dospělých pacientů postačí do 3 ml periferní krve. V případě dětských pacientů by odebraný vzorek neměl být menší než 1 ml.
Současně je třeba provést odběr a nechat stanovit v hematologické laboratoři počet leukocytů a diferenciální krevní rozpočet.
3.3 Odběr pro vyšetření fagocytózy (venózní nesrážlivá krev)Pro vyšetření fagocytózy se používá plná krev odebraná výlučně do heparinu. Jiná protisrážlivá činidla interferují s funkční aktivitou fagocytujících buněk, a nelze je proto pro provedení tohoto testu použít. Po odběru je nutné obsah zkumavky opatrně promíchat (pomalým obrácením nebo kýváním), uchovat při pokojové teplotě a předat svozové službě nebo jinou cestou dopravit do laboratoře týž den.
Pro samostatná vyšetření postačí do 3 ml heparinizované krve.
Zároveň je nutné provést odběr pro stanovení počtu leukocytů v hematologické laboratoři.
3.4 Odběr pro vyšetření míry aktivace lymfocytů periferní krve (venózní nesrážlivá krev)
Pro vyšetření aktivace lymfocytů periferní krve se používá plná krev (cca 3 ml) odebraná výlučně do heparinu. Jiná protisrážlivá činidla interferují s funkční aktivitou lymfocytů, a nelze je proto pro provedení tohoto testu použít. Po odběru je nutné obsah zkumavky opatrně promíchat (pomalým obrácením nebo kýváním), uchovat při pokojové teplotě a předat svozové službě nebo jinou cestou dopravit do laboratoře týž den.
3.5 Odběr pro vyšetření blastické transformace lymfocytů periferní krve (venózní nesrážlivá krev)
Pro vyšetření blastické transformace lymfocytů periferní krve se používá plná krev (cca 3 ml) odebraná výlučně do heparinu. Jiná protisrážlivá činidla interferují s funkční aktivitou lymfocytů, a nelze je proto pro provedení tohoto testu použít. Po odběru je nutné obsah zkumavky opatrně promíchat (pomalým obrácením nebo kýváním), uchovat při pokojové teplotě a předat svozové službě nebo jinou cestou dopravit do laboratoře týž den.
3.6 Odběr pro analýzu počtu a zároveň funkční aktivity leukocytů periferní krve (venózní nesrážlivá krev)
Pro současné zhodnocení fagocytózy a buňkami zprostředkované specifické imunity je možné provést vyšetření v jednom vzorku periferní krve. Tento postup je racionální a snižuje zátěž nemocného. Pro komplexní analýzu se používá plná krev (cca 3 - 5 ml) odebraná výlučně do heparinu. Jiná protisrážlivá činidla interferují s funkční aktivitou buněk imunitního systému, a nelze je pro současné provedení těchto testů použít. Po odběru je nutné obsah zkumavky opatrně promíchat (pomalým obrácením nebo kýváním), uchovat při pokojové teplotě a předat svozové službě nebo jinou cestou opravit do laboratoře týž den.
3.7 Odběr pro imunofenotypizace buněk krevních malignit (venózní nesrážlivá krev)
Pro imunofenotypizaci buněk krevních malignit se používá plná krev (cca 3 ml) odebraná preferenčně do heparinu. Vyšetření je možné provést ze vzorků odebraných do jiných protisrážlivých činidel, např. citrátu, EDTA. Po odběru je nutné obsah zkumavky opatrně promíchat (pomalým obrácením nebo kýváním), uchovat při pokojové teplotě a předat svozové službě nebo jinou cestou dopravit do laboratoře, pokud možno v den odběru nebo následující den.
3.8 Odběr pro test aktivace bazofilů (venózní nesrážlivá krev)
- Doporučuje se odběr provádět minimálně 6 týdnů a maximálně 12 měsíců po akutní alergické reakci.
- Nejméně 24 hodin před odběrem je vhodné vysadit celkově podávaná antihistaminika, glukokortikoidy a kromony.
- Odběr je třeba provést před zahájením kožních nebo provokačních testů.
- Odběr se provádí do 2 ml zkumavky s EDTA. Je vhodné dodržet doporučený objem vzorku (ryska). Zkumavka musí být naplněná vzorkem více než z poloviny. V opačném případě zkumavka obsahuje vyšší koncentraci EDTA ve vzorku, což může vést k falešně negativním výsledkům testu.
- 2 ml krve dostačují k vyšetření cca 15 alergenů.
- Po odběru je třeba zkumavku 8-10x jemně převrátit dnem vzhůru a zpět.
- Vzorek odebrané krve se uchovává při 2-8 °C.
- Do laboratoře k provedení testu je třeba vzorek dopravit v den odběru. Test je vhodné provést co nejdříve po odběru, maximálně do 48 hodin. U lékových alergií je třeba vyšetření provést do 24 hodin o odběru.
Z organizačních důvodů prosíme o odběry pouze ve středu.
4. Odběr jiných materiálů pro imunofenotypizaci buněk krevních malignit 4.1 Odběr kostní dřeně pro imunofenotypizaci buněk krevních malignit
Pro imunofenotypizaci buněk krevních malignit se používá kostní dřeň získaná buď sternální punkcí nebo trepanobiopsií. Vyšetření je možné provést ze vzorků odebraných do heparinu nebo jiných protisrážlivých činidel, např. citrátu, EDTA. Při odběru nelze odhadnout, jak velké množství materiálu bude získáno. Často je získáno pouze malé množství vzorku. Doporučujeme proto do odběrové zkumavky, pokud se nejedná o komerční soupravu, přidat k protisrážlivému činidlu malé množství (0,5 ml) fyziologického roztoku. Po odběru je nutné obsah zkumavky opatrně promíchat (pomalým obrácením nebo kýváním), uchovat při pokojové teplotě a předat svozové službě nebo jinou cestou dopravit do laboratoře, pokud možno v den odběru nebo následující den.
4.2 Odběr výpotku pro imunofenotypizaci buněk krevních malignit
Nádorové buňky mohou být přítomny v buněčných suspenzích, které jsou lokalizovány v tělních dutinách. Imunofenotypizací lze prokázat přítomnost buněk krevních malignit v materiálech získaných punkcí tělních dutin, jako je pleurální výpotek, perikardiální výpotek, ascitická tekutina aj. Přestože se jedná o buněčné suspenze, doporučujeme ošetření vzorku vhodným protisrážlivým činidlem (heparin, citrát, EDTA). Při odběru nelze odhadnout buněčnost vzorku. Optimální množství materiálu nelze předem stanovit. Po odběru je nutné obsah zkumavky opatrně promíchat (pomalým obrácením nebo kýváním), uchovat při pokojové teplotě a předat svozové službě nebo jinou cestou dopravit do laboratoře, pokud možno v den odběru nebo následující den.
4.3 Odběr likvoru pro imunofenotypizaci buněk krevních malignit
Nádorové buňky mohou být přítomny v mozkomíšním moku. Imunofenotypizací lze v likvoru prokázat přítomnost buněk krevních malignit. Vzorek není třeba ošetřit protisrážlivým činidlem. Při odběru nelze odhadnout buněčnost vzorku. Optimální množství materiálu nelze předem stanovit. Vzorek doporučujeme uchovat při pokojové teplotě a předat svozové službě nebo jinou cestou dopravit do laboratoře v den odběru.
4.4 Odběr lymfatické uzliny pro imunofenotypizaci buněk krevních malignit
Nádorové buňky hematopoetického původu mohou být imunofenotypizací prokázány v lymfatických tkáních. Imunofenotypizační vyšetření lze provést pouze v nativním nefixovaném vzorku. Lymfatickou uzlinu nebo její část vložte po extirpaci do nádoby obsahující dostatečné množství fyziologického roztoku. Tkáň nesmí být fixována. Vzorek doporučujeme uchovat při pokojové teplotě a předat svozové službě nebo jinou cestou dopravit do laboratoře v den odběru.
5. Odběr bronchoalveolární lavážní tekutinyVzorek bronchoalveolární laváže pro imunofenotypizační vyšetření je získán při bronchoskopickém vyšetření plic. Vzorek není třeba ošetřit protisrážlivým činidlem. Při odběru nelze odhadnout buněčnost vzorku. Optimální množství materiálu pro analýzu nelze předem stanovit. Obvykle postačí cca 10 - 20 ml. Vzorek doporučujeme uchovat při pokojové teplotě a předat svozové službě nebo jinou cestou dopravit do laboratoře v den odběru.
6
. Odběr slinSliny je doporučeno odebírat ráno mezi 7.00 a 9.00 před čištěním zubů a před snídaní. Ústa předem nevyplachovat. Pokud jsou odebírány v průběhu dne, je třeba počkat alespoň 30 min. po posledním jídle nebo pití.
Odběr usnadňují speciální k tomuto účelu určené zkumavky Salivette (Sarstedt), které vám na vyžádání můžeme dodat. Obsahují tampon, který se vkládá pod jazyk, a poté v uzavřené zkumavce transportuje do laboratoře. Odběr je takto snadné provést i u malých dětí.
7. StolicePro vyšetření přítomnosti antigenu Helicobacter pylori je dostačující vzorek stolice o velikosti lískového oříšku. Vzorek stolice je třeba do cílové laboratoře dopravit do 2 - 3 dnů od odběru. Po dobu dvou dnů může být uchován při běžné pokojové teplotě. Rovněž je možno jej uskladnit při teplotě 2 - 8°C, kde vydrží bez ovlivnění výsledků analýzy až 3 dny. Vzorky by neměly být opakovaně rozmrazovány. Zamrazit je proto lze až v laboratoři, která bude provádět vyšetření.
Pozn.: Antibiotika, inhibitory protonové pumpy a sloučeniny bismutu působí jako inhibitory růstu
H. pylori. Vzorky stolice k testování je proto doporučeno odebírat nejdříve za 2 týdny po ukončení užívání inhibitorů protonové pumpy a sloučenin bismutu, resp. minimálně za 4 týdny po ukončení užívání antibiotik. Používá-li se test k monitorování úspěšnosti eradikační terapie infekce
H. pylori, doporučený interval je 4 - 6 týdnů po ukončení léčby.
Pro stanovení koncentrace kalprotektinu lze vzorek odebrat:
1. do jakékoli prázdné čisté nádobky. Dostačující je vzorek o velikosti lískového oříšku. Kalprotektin je ve vzorku stolice stabilní zhruba týden. Během této doby je třeba vzorek dopravit do cílové laboratoře a zpracovat. Uchovává se optimálně v lednici (při 2 - 8°C), krátkodobě nevadí ani pokojová teplota. Vzorky stolice se nemrazí. Zamražení může vést k mírnému zvýšení koncentrace kalprotektinu v důsledku uvolňování z neutrofilů, které mohou být ve vzorku přítomny.
2. do speciální zkumavky ScheBo Quick-Prep s pufrem. Zkumavky se před odběrem skladují v lednici (při 2 - 8°C). Otočí se uzávěrem s nabírací špičkou proti směru hodinových ručiček a uzávěr se vytáhne z víčka zkumavky. Špička se zasune do vzorku stolice, do hloubky cca 2 cm. Totéž se opakuje 3-5x tak, aby se všechny drážky špičky zaplnily vzorkem. Špička se vloží zpět do zkumavky. Otočí se uzávěrem po směru hodinových ručiček, čímž se zkumavka pevně uzavře. Zkumavku poté již neotevíráme a v den odběru ji dopravíme lékaři nebo do laboratoře. Vzorek je stabilní po dobu 24 hodin při uchování v lednici (při 2 - 8°C).
Odběrové nádobky na stolici na vyžádání dodává naše laboratoř.
8. LikvorVzorek lze uchovat při 20 - 25°C maximálně 24 hodin, při 4 - 8°C 7 dní. Optimální je dopravit vzorek do laboratoře v den odběru.
9. Odběr ejakulátuPacient musí být poučen o způsobu odběru ejakulátu, event. jeho transportu. Před vyšetřením je nutná konstantní doba 48 hodin až 7 dnů bez ejakulace. Stabilizace parametrů spermiogramu nastává 5. den pohlavní abstinence. Tato doba se jeví jako optimální k odběru vzorku pro vyšetření. Odběrová nádoba musí být čistá, prostá zbytků dezinfekce a chemikálií. Je možný odběr i v domácím prostředí, pacient musí dostat vhodnou nádobu a transport ke zpracování nesmí trvat více jak 60 minut. Nádoba musí být transportována ve tmě a v teplotě blízké teplotě těla. Vzorek musí být získán masturbací. K odběru není možné použít kondom.
